Đề tài Vaccine ngừa dịch tả từ cây lúa

VACCINE NGỪA DỊCH TẢ 	TỪ CÂY LÚANhóm thực hiệnHuỳnh Lâm Châu DuyênNguyễn Ngọc Quỳnh GiaoNguyễn Thành LêLê Hồng PhúcNguyễn Cao PhúcNguyễn Thị Kim PhúcI. Một số khái niệm cơ bản Chuyển gene là gì? Mục đích chuyển gene: thêm một thông tin di truyền ngoại lai vào genome, cũng như để ức chế một gen nội sinh. Nguyên tắc cơ bản: đưa một hoặc vài gen ngoại lai vào động, thực vật Chuyển gene trực tiếp Chuyển gene gián tiếp - Qui trình thực hiện:- Một số phương pháp chuyển gene:- Điện xung- Vi tiêm- Shock nhiệt- Bắn gene- Nhờ virus và phage- Nhờ Agrobacterium tumefaciensVaccine truyền thốngII.	Sản xuất Vaccine từ gạoVaccine đường miệngII.1	Cơ sở khoa học của vaccine ăn đượcĐã có nhiều kháng nguyên vaccine được sản xuất ở nhiều hệ thống sinh vật.- Thực vật có thể là phương tiện hữu hiệu nhất để sản xuất vaccine với nhiều ưu điểm:Dễ tăng quy mô sản xuấtTính ổn định cao, dễ bảo quản, sử dụngĂn đượcAn toàn, hiệu quảChi phí thấpChọn gene CTB từ vi khuẩn tả Vibrio CholeteraeII.2	Nguyên lý thực hiệnII.2.a	 Cấu trúc DNA và sự chuyển geneGene CTB được biến đổi cho phù hợp=> Chèn vào binary vector (pGPTV-35S-HPT)- Chuyển gene bằng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens(B) Chọn giống lúa Kitaake và Hosetsu để biểu hiện gene CTB(C) Dùng kĩ thuật PCR để xác nhận sự sát nhập gene CTB vào DNAWT: Wild-type lúa không chuyển gene Tg: lúa chuyển gene CTB(D) Dùng phương pháp Northern blot để xác nhận sự biểu hiện của mRNA đoạn mã CTBII.2.b	Phân tích DNA và RNA(E) Dùng phương pháp Western blot với gel SDS/PAGE cho thấy nồng độ cao protein CTB được biểu hiện (12 – 15 kDa)II.2.c	 Phân tích ProteinThe CTB protein,composed of two fragments, forms a 55 to 65 kDa pentamer structure under nonreducing conditions. Arrows indicate monomeric (under reducing condition) and pentamer (under nonreducing condition) forms of CTB (F).(A) CTB được lưu trữ trên bề mặt PB-I (arrowheads) and PB-II (arrows). II.2.d	 Xử lý với Pepsin(B) 90% glutelins bị tiêu hoá bởi pepsin trong khi 13k prolamins không bị thay đổi lớn in vitro, 75% CTB trong gạo không bị ảnh hưởng bởi pepsinII.2.e	 Các tế bào tiếp nhận(A) CTB trong gạo được chuyển vào màng ruột. Ba mươi phút sau,CTBs được nhận bởi các tế bào UEA-1-positive M (arrow), chứ không phải là các biểu mô hình trụII.2.f	 Sự miễn dịch qua đường tiêu hoáII.2.g	Thí nghiệm kiểm chứng Dùng phương pháp GM1 – ELISA đo OD ở bước sóng 450nm cho các loại huyết thanh của chuột: 	được cho ăn gạo chuyển gene	sử dụng rCTB tinh chế	được cho ăn gạo bình thường	được cho ăn PBS(C) Ngược với chuột thử nghiệm với gạo bình thường hoặcPBS, chuột được miễn dịch với vaccine qua đường tiêu hoá với gene CTB cho thấy không có triệu chứng bị dịch tả và có lượng thấp nước trong ruột.Là loại vaccine mới hiệu quả caoChi phí sản xuất thấp, dễ bảo quản Giúp ngăn ngừa bệnh dịch tả ở các nước đang phát triển III. 	Kết luận	Tài liệu tham khảoPhạm Thành Hổ, Nhập môn Công nghệ sinh học. NXB Giáo dụcHồ Huỳnh Thuỳ Dương, Sinh học phân tử. NXB Giáo Dục.1999Ðặng Hữu Lanh, Trần Ðình Miên, Trần Ðình Trọng. Cơ sở di truyền chọn giống động vật. NXB Giáo dục, Hà Nội. 1999